熒光物質(zhì)是具有共軛雙鍵體系化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物,受到紫外光或藍(lán)紫光照射時,可激發(fā)成為激發(fā)態(tài),當(dāng)從激發(fā)態(tài)恢復(fù)至基態(tài)時,發(fā)出熒光。由于熒光標(biāo)記較放射標(biāo)記具有無放射物污染等優(yōu)點,已經(jīng)讓熒光標(biāo)記成為研究中的熱點。
分子成像技術(shù)因其較高的專一性在當(dāng)代醫(yī)學(xué)診斷學(xué)上具有重要作用。它們能夠在分子水平上研究活體對象,將一些疾病發(fā)展和治療康復(fù)過程中的重要分子信息可視化。熒光標(biāo)記是一類重要的分子成像技術(shù),它具有自身獨特的優(yōu)點:高靈敏性、使用材料的非放射性、檢測過程的安全性,而且成本不高。
活性多肽分子可以被熒光基團標(biāo)記,應(yīng)用于熒光成像領(lǐng)域。熒光基團分子具有以下功能:其吸收特定波長能量的光子后,立即在另一較長波長區(qū)域釋放出具有一定能量的光子。對于熒光基團染色能力和效率,有一系列參考準(zhǔn)則(主要考察其吸收光子和釋放光子,以及重復(fù)上述過程)。在這些標(biāo)準(zhǔn)中,摩爾消光系數(shù)ε和量子效率QY是最重要的兩個衡量熒光強度的參數(shù),它們與光子吸收和熒光發(fā)射密切相關(guān)。通常來說,摩爾消光系數(shù)ε在5000~250000 cm-1 M-1范圍之間,量子效率QY在0.05-1.0之間的熒光素將滿足分子作為熒光基團的基本要求。
如何選擇合適的熒光標(biāo)記基團取決于您的實驗需求。藥理學(xué)實驗研究基本分為體內(nèi)研究和體外研究兩大類。對于體內(nèi)研究,一般選擇發(fā)射波長在650-900nm的熒光基團,例如:ICG、Cy5.5和Nile Blue。這是因為這類基團所發(fā)出的熒光具有較好的組織穿透能力,受背景干擾較小(水、血紅蛋白和脫氧血紅蛋白一般都會產(chǎn)生背景干擾吸收,其區(qū)域在560nm左右)。對于體外研究,發(fā)射波長在400到600nm的熒光基團最為常用,例如:AMC、FITC和TAMRA。
熒光標(biāo)記的多肽在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用是很廣泛的。例如:用Cy5.5標(biāo)記的目標(biāo)多肽研究對c-Met受體的綁定作用。有人設(shè)計含有KSLSRHDHIHHH序列的cMBP,其C端 為GGGSC, C端Cys用Cy5.5-Maleimide標(biāo)記其巰基側(cè)鏈。研究結(jié)果表明:上述Cy5.5-cMBP多肽與U87MG腫瘤細(xì)胞共孵24小時后,具有較高的癌細(xì)胞攝取值,其響應(yīng)濃度在納摩爾級別。